01分光光度法简介
光度法在亚硝酸盐测定中扮演着至关重要的角色。包括经典和新颖的方法。除了经典的格里斯试剂比色法及其改良方法外，还有多种新兴的光度法技术被报道，如催化（褪色）光度法、流动注射系统与分光光度法的结合、顺序注射系统与分光光度法的联合应用，以及导数光度法等。这些方法为亚硝酸盐的测定提供了更多的选择和可能性。此外，分光光度法根据其工作原理和波长范围，主要可分为可见分光光度法、紫外分光光度法和红外分光光度法三大类。
02可见分光光度法
在测定水样中的亚硝酸盐时，常采用苯胺-α-萘酚分光光度法。在nm处测量亚硝酸盐，具高选择性。其原理为：苯胺与亚硝酸盐在盐酸介质中发生重氮化反应，随后在NaOH溶液中与α-萘酚偶联，生成桔红色产物。实验结果显示，该产物的最大吸收波长为nm，线性范围为0～0.96mg/L，且方法简单、快速，选择性好。此外，苯胺-α-萘酚体系使用的试剂稳定、毒性较低，因此得到了满意的结果。
03紫外分光光度法
在酸性环境中，亚硝酸盐会与间苯二酚及锆氧离子发生反应，生成有色螯合物。这一反应为食品中微量亚硝酸盐的简易快速测定提供了基础。通过对猪肉、午餐肉、火腿肠、香肠等多种肉制品的亚硝酸盐含量进行测定，适用于肉制品中的检测。该方法展现出了高达90%以上的回收率。其操作简便、快速且干扰少，具有良好的选择性，同时显色反应产物的稳定性也相当出色，因而成为测定肉制品中亚硝酸盐的较为理想的方法。
此外，导数法与紫外分光光度法的结合进一步拓展了其应用范围。导数光度法通过求导光谱进行定性或定量分析，灵敏度高、操作简便且选择性显著。高阶导数能有效地分辨重叠光谱，甚至提供独特的“指纹”特征，非常适用于消除干扰和同时测定多组分。这一方法在食品分析中，特别是混合组分含量的测定方面，展现出了显著的优势。
04催化（褪色）分光光度法
催化（褪色）分光光度法，其原理在于亚硝酸根在稀磷酸溶液中能催化Evan’sBlue与一氯酸钾的氧化还原反应。同时，利用Evan’sBlue和氯酸钾反应构成无毒测定新方法。在硫酸介质中，亚硝酸根又能催化氧化氯酸钾，进而促使吡啶橙发生褪色反应。基于这一反应机制，我们建立了微量亚硝酸根的催化光度法，为肉制品中亚硝酸盐的测定提供了新的手段，且该方法与国家标准方法相契合。此法不仅适用范围广泛、无毒且灵敏度高、选择性好，还简化了设备并优化了操作流程，有效避免了现行国家标准中使用致癌物α-萘胺作为显色剂的不利情况。
在实施过程中，需注意酸度、反应温度、反应时间、溴酸钾和吡啶用量以及其他共存离子对测定结果的影响。此外，该方法同样适用于水中痕量亚硝酸盐的测定。
05流动注射与分光光度法
流动注射系统与分光光度法的结合也为食品中硝酸盐或亚硝酸盐的测定提供了新的选择。提高工作效率，适合大批量样品分析。该方法操作简便快捷，大大提高了工作效率，降低了分析人员的劳动强度，尤其适用于大批量的样品分析。
06示波极谱法
示波极谱分析法是一种电化学方法定量测定亚硝酸盐，灵敏度和精确度高。通过在特殊条件下进行电解分析并记录电流-电压曲线来进行定量和定性分析。该方法具有灵敏度高、适用范围广、检出限低以及测量误差小等显著优点。
在测定过程中，样品需经过沉淀蛋白质和去除脂肪的处理步骤。随后，在弱酸环境下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再于弱碱性条件下与8-羟基喹啉偶合生成染料。该染料在汞电极上还原时产生的电流与亚硝酸盐浓度呈线性关系，从而可与标准曲线进行定量对比。
采用单扫描示波极谱法对香肠中的亚硝酸盐进行测定，结果显示该方法与分光光度法基本一致，且检测限达到3×10-9g/mL。
07荧光分析法
荧光分析法是一种高灵敏度和选择性，仅受特定条件限制。通过测量物质荧光强度来进行定量分析的方法。虽然该方法在亚硝酸盐测定方面的具体应用未在本节详细展开，但它同样具有灵敏度高、选择性好等优点，值得进一步研究和探索。
荧光分析法，作为光谱分析法的一种，其原理在于亚硝酸盐与过量的对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，剩余的对氨基苯磺酸再与荧光胺结合，生成稳定的荧光团及无荧光的水解产物。在特定波长下，该荧光团的强度与对氨基苯磺酸的量呈正比，进而可推算出亚硝酸盐的含量。此法不仅灵敏度高、选择性好，而且试样用量少，不受原测液颜色和浑浊度的影响，亦不受样品稀释度变化之干扰。然而，其操作相对复杂，对环境因素敏感，且干扰因素较多，适用范围亦有待进一步拓展。
08离子色谱法
离子色谱法作为液相色谱法的一种，同样可用于亚硝酸盐的测定。能同时测定多种阴离子，适合果汁等样品。例如，采用离子色谱/电导检测法可同时测定苹果汁中的亚硝酸盐、硝酸盐和硫酸盐含量。通过IonPacASll－HC阴离子交换分离柱及30mg/L氢氧化钾流动相，配合自动再生抑制型电导检测器ASRS一4mm，该方法展现出良好的线性和重复性，相关系数高达0.，相对偏差小于3%，且回收率达到97.0%。